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PCR產(chǎn)物的克隆-DNA回收實驗步驟

PCR產(chǎn)物的克隆-DNA回收實驗步驟【實驗原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在適當濃度的瓊脂糖凝膠中，通上一定電壓進行電泳，不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開。切下帶有所需DNA片段的凝膠，用凍融法、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化。2.利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以把PCR產(chǎn)物插入到質(zhì)粒載體的多克隆位點，可用于PCR產(chǎn)物的克隆和測序。商品化的T載體有很...

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實時熒光pcr檢測DNA濃度常用的生物試劑

實時熒光pcr檢測利用熒光分析法用特定結(jié)合DNA的染料來測定DNA的濃度。常用的DNA染料包括溴化乙錠、Hoechst33258、SYBRGreenI和II、SYBRGold及PicoGreen。溴化乙錠溴化乙錠含有三環(huán)菲嚏平面環(huán)系統(tǒng)，可嵌入到雙鏈DNA堿基之間。嵌入DNA雙螺旋后，溴化乙錠的菲嚏環(huán)平面位于與螺旋軸相垂直的位置，并通過范德瓦耳斯力與上下堿基結(jié)合。而其平面環(huán)系統(tǒng)被埋在底部，其外側(cè)的苯基和乙烷基處于DNA雙螺旋的大溝內(nèi)。在高強度離子溶液的飽和狀態(tài)，大約每2.5個堿...

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熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案

熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案無Ct值或Ct值延遲出現(xiàn):擴增曲線信號不佳，曲線不平滑:標準曲線線性差。1.擴增產(chǎn)物大小不合適：實時熒光定量PCR擴增片段的長度通常在80-150bp之間，如果調(diào)整反應(yīng)的時間有可能擴增500bp的片段。2.PCR反應(yīng)過程中退火及延伸的時間過短或過長：應(yīng)根據(jù)擴增片段的大小予與調(diào)整。3.MgCl,濃度不合適：按0.5mm的間距調(diào)整MgCI2的濃度。4.循環(huán)數(shù)設(shè)置不足：最少設(shè)置35個循環(huán)，可以增加到45個循環(huán)。超過45個循環(huán)以上背景信號會增...

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消毒和滅菌的區(qū)別

微生物行業(yè)及微生物實驗室經(jīng)常會用到消毒、滅菌和清潔那么清潔、消毒和滅菌的區(qū)別是什么呢？滅菌滅菌的定義是破壞或消除所有形式的微生物生命的過程，并通過物理或化學方法在設(shè)施中進行。加壓蒸汽、干熱、EtO氣體、過氧化氫氣體等離子體和液體化學品是醫(yī)學環(huán)境設(shè)施中使用的主要消毒劑。其實滅菌和消毒是有區(qū)別的，一些衛(wèi)生專業(yè)人員以及技術(shù)和商業(yè)文獻將“消毒”稱為“滅菌”，將物品稱為“部分無菌”。當化學品被用來破壞所有形式的微生物生命時，它們可以被稱為化學消毒劑。這些用于較短暴露時間的相同殺菌劑也可...

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季銨鹽類消毒劑是什么

季銨鹽類消毒劑是什么？季銨化合物廣泛用作消毒劑。季銨鹽是較好的清潔劑，但高硬度的水和棉和紗布墊等材料會使它們的殺菌性降低，因為不溶性沉淀物或棉布和紗布墊分別吸收了活性成分。季銨化合物與其他幾種消毒劑（例如酚類物質(zhì)、碘伏）一樣，革蘭氏陰性菌可以在其中存活或生長。季銨化合物消毒劑的化學性質(zhì)在化學上，季銨鹽是有機取代的銨化合物，其中氮原子的化合價為5，其中四個取代基(R1-R4)是給定大小或鏈長的烷基或雜環(huán)基，第五個(X-)是鹵化物、硫酸鹽或類似的自由基.每種化合物都表現(xiàn)出自己的抗...

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